本发明提供了一种山葡萄种质资源休眠期抗寒性的鉴定方法，包括如下步骤：将休眠期的山葡萄枝条在不同冷冻温度下冷冻处理后剥去表皮，放入氯代三苯基四氮唑染色液中，置于恒温环境中进行染色处理；冲去山葡萄枝条表面的染色液，根据山葡萄枝条木质部染色面积确定染色级别，并根据染色级别计算出山葡萄枝条的染色指数；根据山葡萄枝条的冷冻温度所对应的染色指数确定低温半致死温度。低温半致死温度越低，表明该山葡萄种质的抗寒性越好。由于采用TTC染色法在测定过程中受外界因素影响较小，且结果直观，因此，采用该方法鉴定山葡萄种质资源休眠期抗寒性简便易行，准确可靠。